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best365体育下载|斑马鱼甲状腺素(T4)ELISA实验说明

更新时间:2024-03-07 浏览次数:347

检测范围:


60pmol/L -2200 pmol/L


使用目的:


本试剂盒用于测定斑马鱼血清、血浆及相关液体样本中甲状腺素(T4)含量。


实验原理:


本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中斑马鱼甲状腺素(T4)水平。用纯化的斑马鱼甲状腺素(T4)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入甲状腺素(T4),再与HRP标记的甲状腺素(T4)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻-底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的甲状腺素(T4)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中斑马鱼甲状腺素(T4)浓度。


标本要求 :


1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻

2.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。


操作步骤:


1.标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。


2000 pmol/L5号标准品150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液

1000 pmol/L4号标准品150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液

500 pmol/L3号标准品150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液

250pmol/L2号标准品150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液

125 pmol/L1号标准品150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液



2.加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。


3.温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

 

4.配液:将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用


5.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。


6.加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。


7.温育:操作同3。


8.洗涤:操作同5。


9.显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色10分钟.


10.终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。


11.测定:以空白孔调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。


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