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best365体育下载|关于无外泌体血清的制备步骤以及相关注意事项

更新时间:2024-01-19 浏览次数:424

无外泌体血清是一种可由多种细胞分泌的直径为30-150nm的膜性小囊泡。经研究后发现,其内含有独-特的蛋白质与核酸分子,所含成份与其细胞来源密切相关,这也决定了无外泌体血清的功能特异性,如抗原提呈、信号传导或诱导抗肿瘤免疫反应、细胞迁移、细胞分化、细胞间通信、肿瘤转移等。目前,无外泌体血清研究已经成为临床诊断与基础医生的新热点。


以外泌体为代表的细胞外囊泡是近几年研究的热点,目前的外泌体研究主要通过研究体外培养细胞来源的外泌体,分析其在体内外的功能作用。一般的血清FBS中含有供体细胞自然分泌的大量Exosomes,而用于Exosome研究的细胞必须提前更换无外泌体的血清进行培养,以减少对后续实验结果的污染。


目前市面上存在着商业化的无外泌体血清,然而由于其价格较高等因素,很多研究者选择自己制备无外泌体血清,而常用的主要是基于超速离心的无外泌体血清分离方法。


一、无外泌体血清产品特点:


1、内毒素含量低,三次纳米级过滤


2、严格控制批次差异


3、来源可靠、可溯源


4、每个批次提供相应检验检疫报告


5、适合各种特殊细胞培养


6、干冰运输,建议存储温度为-20℃至-10℃


二、无外泌体血清制备步骤:


1. 根据需要处理的血清体积选择合适的转子与超离管。


2. 在超净工作台,将普通血清置于超离管中,配平后,进行热封口。


3. 将封口后的超离管放于离心机转子中,并加入相应适配器然后拧紧转头盖。


4. 设置离心程序:4℃,120,000 ×g,离心18小时(也有研究者选择100,000 ×g离心18小时)。


5. 离心结束后,回收上清液,为避免污染,在超净工作台操作。


6. 收集得到无外泌体血清,并储存于-20℃中备用。


三、无外泌体血清的这些注意事项请注意了:


1. 离心后,血清外泌体会富集在管底和管壁;


2. 吸取血清时,只吸取澄清部分的血清,并且远离上图中标记的区域;


3. 吸取70-80%的澄清的血清;


4. 其余的浑浊血清留作正常细胞的的营养物添加使用,避免浪费。


5. 如果觉得纯度不够,再把离心后收集的血清做二次超速离心。


6. 针对超速离心后的血清,必须进行粒径检测(离心前样品和离心后样品),该数据可以放到文章补充材料中,用来证明无血清外泌体制备成功。

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