best365体育-best365体育app下载

产品分类

您的位置:首页 > 技术文章 > 免疫组化的具体步骤

技术文章

免疫组化的具体步骤

更新时间:2024-01-04 浏览次数:358

一 免疫组化( LP 法)操作步骤 :

1. 切片常规脱蜡至水。如需抗原修复,可在此步后进行

2. 缓冲液洗 3min/2 次。

3. 为了降低内源性过氧化物酶造成的非特异性背景染色 , 将切片放在 Hydrogen Peroxide Block 中孵育 10-15 分钟。

4. 缓冲液洗 5min/2 次。

5. 滴加 Ultra V Block , 在室温下孵育 5 分钟以封闭非特异性的背景染色。

(注:孵育不要超过 10 分钟,否则会导致特异性染色降低。如果一抗的稀释液中含有 5 10% 正常羊血清,这一步可以省略。)

6. 缓冲液洗 5min/2 次。

7. 滴加一抗工作液 37 ℃孵育 1 2 小时。(具体孵育时间和温度由试验者最终决定)

8. 缓冲液洗 5min/2 次。

9 . 滴加 Primary Antibody Enhancer( 增强子 ) , 在室温下孵育 20 分钟。

10 .缓冲液洗 5min/2 次。

11 .滴加 HRP Polymer( 酶标二抗 ) ,在室温下孵育 30 分钟。

(注: HRP Polymer 对光敏感,应避免不必要的光暴露并储存在不透明的小瓶中。)

12 .缓冲液洗 5min/2 次。

13 .向 1ml DAB Plus Substrate ( AEC Plus Substrate) 中滴加 1-2 DAB Plus Chromogen (或 AEC Plus Chromogen , 混匀后滴加到切片上,孵育 3 15 分钟。(具体时间由染色深浅决定。)

14 .自来水充分冲洗 , 复染,脱水 , 透明 , 封片。

 

二.免疫组化 ( 三步法 ) 操作步骤 :

1 )、石蜡切片脱蜡至水。

2 )、 3%H 2 O 2 室温孵育 5-10 分钟,以消除内源性过氧化物酶的活性。

3 )、蒸馏水冲洗, PBS 浸泡 5 分钟 x2 (如需抗原修复,可在此步后进行)。

4 )、 5-10% 正常山羊血清( PBS 稀释)封闭,室温孵育 10 分钟,倾去血清,勿洗。滴加 一抗 工作液, 37 ℃ 孵育 1-2 小时或 4 ℃ 过夜。

5 )、 PBS 冲洗, 5 分钟 x3 次。

6 )、滴加适量 生wu素标记二抗 工作液, 37 ℃ 孵育 10-30 分钟。

7 )、 PBS 冲洗, 5 分钟 x3 次。

8 )、滴加适量的 辣根酶或碱性磷酸酶标记的链霉卵白素 工作液, 37 ℃ 孵育 10-30 分钟。

9 )、 PBS 冲洗, 5 分钟 x3 次。

10 )、显色剂显色 3-15 分钟( DAB NBT/BCIP

11 )、自来水充分冲洗,复染,脱水,透明,封片。

 

. 冰冻切片免疫组化染色步骤:

冰冻切片 4-8um ,室温放置 30 分钟后,入 4 ℃丙酮固定 10分钟,PBS洗,5分钟x3,用过氧化氢孵育5-10分钟,消除内源性过氧化物酶的活性。以下同石蜡切片免疫组化


best365体育-best365体育app下载(www.shjmsw.com)主营:ELISA检测试剂盒;免疫组化试剂盒,胎牛血清;酶联免疫试剂盒,进口抗体,生物试剂

邮箱:2885306215@qq.com

地址:上海市松江区漕河泾研展路455号B座

版权所有 © 2024 best365体育-best365体育app下载   备案号:沪ICP备15015681号  管理登陆  技术支持:环保在线  sitemap.xml

在线客服 在线咨询 联系方式 二维码

服务热线

13817140470

扫一扫,添加微信